Zoetis

Aunque puede utilizarse en cualquier etapa productiva, esta metodología está especialmente indicada en maternidades vacunadas y/o seropositivas en las que se quiere estudiar colectivamente la presentación de viremia en los lechones al nacimiento y al destete.

A partir del tercer mes de gestación, la placenta se vuelve especialmente permeable al virus PRRS, algunos fetos pueden infectarse verticalmente (no necesariamente todos). Clínicamente se presenta un incremento de nacidos débiles y muertos en los que el virus es detectable y se puede analizar mediante qPCR.

Existen diferentes tipos de métodos y muestras válidas para este diagnóstico. El muestreo agregado (pools) es una práctica muy recomendable que permite incrementar el tamaño muestral sin que también lo haga el coste de las analíticas y de los envíos al laboratorio.

• Pools de muestras de suero.
• Pools de porciones de lengua.
• Pools de colas.
• Pools de testículos.

Tipos de muestras

La muestra de sangre de lechones nacidos débiles de <3 días de vida es potencialmente muy sensible, aunque su toma es dificultosa y el tamaño muestral está limitado. Es determinante escoger con buen criterio los lechones que chequeamos. Es un muestreo de abordaje, adecuado para “primera visita”, si el veterinario lo decide, es preferible que lo realice él mismo sin retraso.

Las lenguas de lechones mortinatos, o nacidos débiles sacrificados eutanásicamente, o nacidos débiles y muertos en las primeras 48 horas de vida son la muestra de toma más sencilla. Aunque el tamaño muestral sea inferior, la sensibilidad es superior a la obtenida mediante colas/testículos porque se trata de una muestra más irrigada y tomada únicamente en animales sospechosos de viremia.

Las colas y/o testículos se toman por indicación veterinaria durante el procesado de los lechones. El muestreo es muy sencillo para el personal de la granja. La sensibilidad potencial para la detección del virus es inferior a la del muestreo de sangre o de lenguas, en parte se compensa por el mayor tamaño muestral.

Cuando el objetivo es valorar la recirculación del virus en gestación y la viremia al nacimiento

La porción de lengua es nuestra muestra recomendada para este objetivo (con excepciones, que más adelante se explican*). En el caso de una maternidad inestable, el porcentaje de animales virémicos neonatos siempre será superior en el grupo de los muestreados en lengua que en el de colas. Es una muestra con sensibilidad potencial alta, muy adecuada para diagnóstico.

El muestreo de colas/testículos es más generalista, útil para la monitorización rutinaria y para el seguimiento de una maternidad POS en curso de estabilización en la que nos estamos planteando la vacunación de lechones y queremos seguir y conocer por separado la evolución de la viremia neonatal de los hijos de primíparas y multíparas. No olvidemos que las muestras de testículos son más sensibles que las de colas.

Ambos métodos son complementarios, la opción elegida dependerá de las circunstancias, del momento epidemiológico de cada granja y del criterio del veterinario. Por ejemplo, un contagio en preparto (*recién entradas las cerdas desde gestación a las salas de una maternidad inestable) no cursará con nacidos muertos, en este caso, el muestreo de colas/testículos será el indicado en lugar del de lenguas.

Cuando el objetivo es valorar el DESTETE de lechones NO virémicos

El nacimiento de lechones avirémicos no garantiza que también lo sea su destete. Lactancia de nodrizas a lechones de distintas bandas, existencia de grupos dinámicos de lechones retrasados, grupos dinámicos de lactancia artificial dentro de las salas de partos y/o contaminación aerógena entre salas de parto pueden provocar transmisión encadenada entre bandas y mantener la presencia del virus PRRS en las maternidades.

El resultado NEG en fluidos de procesado debe complementarse con la toma dirigida y análisis de pools de muestras de sangre de lechones retrasados al destete y/o de fluidos orales a entrada en transición.

¿Cómo hacer el muestreo?

Para el muestreo, preparación y envío de las muestras se necesitan:

• Bolsas de plástico resistente, asépticas o estériles, que puedan cerrarse herméticamente (tipo Zip).
• Rotulador o lápiz indeleble y guantes de un solo uso libres de talco (inhibe la PCR).
• Instrumental estéril de corte (tijeras o bisturí) libre de yodo u otros antisépticos inhibidores de la PCR.
• Congelador de -25ºC. Debemos conservar y congelar las muestras antes de su envío al laboratorio (durante el transporte, la descongelación facilitará el exudado de los fluidos).

Además, antes del muestreo agregado, disponer bolsas o contenedores rotulando en cada una de ellas:

• Identificación de la explotación (nombre, REGA, empresa, integradora) y veterinario responsable.
• Número de la banda muestreada.

Decidir los grupos de lechones cuyas muestras vamos a agregar. Por ejemplo; por número de paridad de sus madres, indicar 1P, 2/3P o >3P, para las de primer, segundo y tercer o >3 partos, respectivamente. Preparar una bolsa específica para agregar por separado las muestras de cada edad de parición y utilizar guantes e instrumental de corte específico y exclusivo en cada edad. También podemos congelar y conservar las muestras mientras agrupamos varias semanas de muestreo antes del envío al laboratorio. Preparar tantas bolsas como grupos de muestreo hayamos decidido.

Indicaciones de toma o agregado en la bolsa:

• En el caso de sangre, volumen mínimo 3 ml. Desuerar cuando se quiera congelar la muestra.
• En el caso de colas cortadas con cauterizador, recortar de nuevo la cola con tijeras para facilitar la salida del exudado.
• En el caso de testículos, glándulas enteras.
• En el caso de lengua, cortar en la punta una porción de 2-3 cm.
• Las muestras se enviarán congeladas al laboratorio. Cada bolsa se cerrará perfectamente, asegurando la ausencia de derrames y se introducirá en una segunda bolsa protectora.
• Documentar el envío y contratar un servicio de transporte <24 h. Utilizar cajas isotérmicas rígidas y resistentes y placas refrigerantes.

OVISLab recomienda ≤30 muestras agregadas por bolsa, aunque está demostrada la sensibilidad de la técnica con mayor número de muestras agregadas. La experiencia y la prudencia nos hacen desaconsejar 40-50 muestras por bolsa, no se debe confundir el tamaño muestral con el de un pool para análisis agregado. Al contenido de cada bolsa se le realizará una qPCR en el laboratorio.

En las grandes explotaciones, el mayor número de muestras disponibles nos permite profundizar en el planteamiento del estudio. Pueden prepararse para cada edad de parición, por salas de parto, por grupos genéticos (GP, GPP), por orígenes del semen, etc.

En las granjas de menor tamaño, pueden tomarse muestras durante varias semanas y conservarlas en el congelador, la sangre debe desuerarse para congelarla o enviarse al laboratorio.

Consideraciones extras

Evitar la contaminación arrastrada entre las distintas bolsas es el punto crítico de este muestreo. Lo más recomendable es seguir un orden predeterminado para cada grupo de toma de muestras, agregando por turnos y cambiando de guantes e instrumental de corte cada vez que cambiemos de bolsa. Las muestras de los lechones de primíparas deben tomarse las últimas. Si preparamos una bolsa única, no son necesarias estas precauciones. En todos los casos, el instrumental de corte se limpiará y desinfectará después de cada sesión de muestreo.

La higiene es fundamental. Suciedad, detergentes, desinfectantes y arena secante en la bolsa de muestras pueden inhibir la PCR. No esparcir secante en los paritorios los días previstos para un muestreo de colas.

En transición y cebo también puede realizarse el muestreo de lenguas de cadáveres siguiendo las mismas especificaciones descritas:

• En transición, se preparan bolsas específicas para cada semana post destete, también es posible agregar todas las muestras en una misma y única bolsa.
• En cebo, las muestras se toman, agregan a la bolsa y congelan a lo largo de la crianza, enviando periódicamente bolsas al laboratorio. En cebos multi origen también puede tener interés el agregado en bolsas separadas según el origen.

El secuenciado es un estudio complementario al que deberemos recurrir para interpretar los resultados POS, porque nos preguntaremos si los origina el virus vacunal o el de campo. Necesitaremos muestras con suficiente carga de virus y no es el caso de las muestras agregadas, que tienen reducida esta concentración, siendo de mayor utilidad aquí las de sangre.

Existe un kit PCR PRRS DIVA registrado por OVISlab que permite analizar y discriminar la cepa VIRUS PRRS 96V198 de la de las restantes cepas EU (vacunales incluidas). Esta prueba evita el secuenciado de las muestras POS tomadas en granjas que utilizan la vacuna Suvaxyn^® PRRS MLV, ganando en mayor rapidez y economía en la disponibilidad de los resultados.